细胞活力、增殖、冻存及细胞凋亡支持 - 入门

2025-05-20 23:13:04

您可能需要根据每种类型细胞和使用条件来决定PrestoBlue™实验铺板的密度和孵育时间，以使实验处于线性范围内。

铺板密度：

当细胞处于指数生长期时，PrestoBlue™试剂测定的细胞增殖最准确。如果细胞密度太高，细胞增殖将会减少，PrestoBlue™试剂的还原少于期望。低细胞密度时，低的生长速率会导致PrestoBlue™的还原不显著。通常建议对数生长期的动物细胞密度为1 x 10E4细胞/mL。然而，由于细胞增殖速率不同，不可能为所有的实验推荐一个细胞密度。取而代之的，我们建议进行一个对照实验来测定您实验的最佳细胞密度。

孵育时间：

优化PrestoBlue™试剂孵育时间同样重要。将细胞在PrestoBlue™试剂中37°C或者在种群/细胞类型最佳的温度条件下培养1-4小时。为了更加灵敏地检测低密度细胞数量，增加孵育时间到24小时。如果您计划使用长的孵育时间（过夜），在添加试剂和培养时确保维持无菌条件降低引入微生物污染物。由于微生物污染物同样会还原PrestoBlue™试剂，污染的培养基会产生错误的结果。

PrestoBlue™试剂包含了专有的缓冲液试剂，可以维持溶液中氧化或还原形式的PrestoBlue™试剂和其他组分的稳定性和可溶性。过度延长细胞的培养时间，缓冲液能力会变为很低，试剂的稳定性和可溶性都会受到影响，导致信号丢失。

另外，如果实验长于PrestoBlue™最佳的培养时间，我们建议使用终点检测法。这种类型的实验对于超过几天、几周和几个月的细胞增殖研究特别有用。PrestoBlue™试剂能用于长期的反复测定的细胞增殖研究。对于此类研究，在终点法检测之前，我们建议每个时间点取得小份的细胞培养基/悬浮液加入PrestoBlue™试剂进行孵育。

如果您测试的化合物有毒性延迟现象（例如细胞几小时或几天后才会表现出反应），我们建议在细胞已经被影响之后的预定孵育末期添加PrestoBlue™试剂。如果PrestoBlue™试剂添加于实验开始阶段，在药物起作用之前，活性细胞将会还原刃天青，因此影响您最终的结果。

如果使用单通道移液枪在96或384孔板上多重孔上加样，为了结果一致，在移动到下一个条件前，给所有条件相同的孔添加PrestoBlue™试剂。当板上最后一个孔试剂添加完成后开始计时。